ELISA試劑盒活化細(xì)胞分泌細(xì)胞因子
目前ELISA法仍在研究當(dāng)中占有著主流地位,ELISA試劑盒的普遍應(yīng)用使得實(shí)驗(yàn)更加方便、經(jīng)濟(jì)和準(zhǔn)確,ELISPOT技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)也決定了它的發(fā)展?jié)摿ΑISPOT法來源于ELISA,相比較傳統(tǒng)的ELISA法有所突破,是定量ELISA技術(shù)的延伸和發(fā)展。ELISA試劑盒由于游離的循環(huán)抗體或CK的半哀期不同,使之在體液中不斷的被代謝或與靶器官結(jié)合,傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)不能確切的反映體內(nèi)的抗體及CK的水平。80年代,國外的科研工作者根據(jù)ELISA技術(shù)的基本原理,建立了體外檢測特異性抗體分泌細(xì)胞和CK分泌細(xì)胞的固相酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)(ELISPOT)。
隨著ELISPOT技術(shù)的不斷發(fā)展,它的優(yōu)勢也漸漸顯示出來,下面將ELISPOT與ELISA法對比區(qū)分。 ?由于是單細(xì)胞水平檢測,ELISPOT比ELISA試劑盒更靈敏,能從20萬-30萬細(xì)胞中檢出1個(gè)分泌該蛋白的細(xì)胞。
捕獲抗體具有高親和力、高特異性、低內(nèi)毒素的單抗,在研究者以刺激劑激活細(xì)胞時(shí),不會(huì)影響活化細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。
ELISA試劑盒通過顯色反應(yīng),在酶標(biāo)儀上測定吸光度,與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得出可溶性蛋白總量。
ELISPOT 也是通過顯色反應(yīng),ELISA試劑盒在細(xì)胞分泌這種可溶性蛋白的相應(yīng)位置上顯現(xiàn)清晰可辨的斑點(diǎn),可直接在顯微鏡下人工計(jì)數(shù)斑點(diǎn)或通過計(jì)算機(jī)輔助的分析系統(tǒng)對斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù), 1個(gè)斑點(diǎn)代表1個(gè)細(xì)胞,從而計(jì)算出分泌該蛋白的細(xì)胞的頻率。(某些研究不僅要測細(xì)胞因子生成量,還需檢測分泌此細(xì)胞因子的細(xì)胞頻率)