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ELISA試劑盒方法對(duì)獻(xiàn)血者梅毒抗體的篩檢價(jià)值

2014-03-19 [851]

梅毒螺旋體抗體檢測(cè)作為輸血安全的必測(cè)指標(biāo),其試驗(yàn)方法與試劑的選擇尤為重要,ELISA試劑盒法篩檢梅毒抗體是目前普遍采用的方法,有關(guān)梅毒抗體ELISA試劑盒的評(píng)價(jià)報(bào)道較多,但多為靈敏度或特異度等少數(shù)評(píng)價(jià)指標(biāo) [1,2] 為了全面客觀(guān)地評(píng)價(jià)ELISA方法對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者梅毒抗體的篩檢價(jià)值,篩檢的真實(shí)性和可靠性,筆者對(duì)我們常用的兩種篩檢試劑盒的檢測(cè)真實(shí)性、可靠性及Cut-off值的合理性進(jìn)行評(píng)價(jià),現(xiàn)報(bào)告如下。
1 材料與方法
1.1 材料 梅毒抗體血清盤(pán)血清40份(購(gòu)自衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心,批號(hào):200103,其中陽(yáng)性22份,陰性18份),另外隨機(jī)抽取西安市有代表性的無(wú)償獻(xiàn)血者梅毒抗體陰性血清100人份。梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒分別由上海伊麗薩生物科技有限公司(以下稱(chēng)ELISA1)和美國(guó)諾泰公司(以下稱(chēng)ELISA2)提供。
1.2 方法
1.2.1 抽樣方法 
將2003年1~5月西安市某血液中心無(wú)償獻(xiàn)血者梅毒抗體陰性血清標(biāo)本按順序、年齡、職業(yè)、文化程度分層,再按隨機(jī)表中隨機(jī)數(shù)字抽樣,分層特征比例按該血液中心前3年無(wú)償獻(xiàn)血者以上分層特征構(gòu)成比例進(jìn)行,抽滿(mǎn)100例為止。
1.2.2 盲法篩檢
由評(píng)價(jià)監(jiān)督者對(duì)考核血清盤(pán)重新編密碼,由2名操作熟練的專(zhuān)業(yè)檢驗(yàn)人員對(duì)編碼血清盤(pán)用上述2種試劑盒進(jìn)行盲法檢測(cè),操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,篩檢結(jié)果由全自動(dòng)酶標(biāo)儀自動(dòng)打印OD值及陰、陽(yáng)性結(jié)果。為考核試劑盒的可靠性,由2名以上專(zhuān)業(yè)檢驗(yàn)人員在條件*相同的情況下,對(duì)考核血清盤(pán)40份血清進(jìn)行第二次盲法篩檢,第二次篩檢前重新編密碼,結(jié)果判讀后再打開(kāi)密碼,核對(duì)結(jié)果。
1.2.3 金標(biāo)準(zhǔn)的確定
衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心梅毒抗體血清盤(pán)已知陽(yáng)性與陰性為金標(biāo)準(zhǔn)。
1.2.4 其實(shí)性評(píng)價(jià)
將40份血清盤(pán)標(biāo)本分為梅毒抗體陽(yáng)性與陰性組,再將篩檢試劑盒的篩檢結(jié)果分為梅毒抗體陽(yáng)性與陰性組,分組數(shù)據(jù)匯入篩檢與診斷試驗(yàn)評(píng)價(jià)四格表,用分式 [3] 分別計(jì)算出真實(shí)性評(píng)價(jià)的8個(gè)指標(biāo),即靈敏度、特異度、假陽(yáng)性率、假陰性率、陽(yáng)性預(yù)告值、陰性預(yù)告值、準(zhǔn)確度及約登指數(shù)。1.2.5 可靠性評(píng)價(jià)
將40份血清盤(pán)樣本*次與第二次篩檢結(jié)果,分別匯入四格表,分別計(jì)算出各試劑盒重復(fù)試驗(yàn)的符合率與卡帕值,卡帕值的判定標(biāo)準(zhǔn)按Fleiss提出的3級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià),即0.75~1.00為符合很好,0.4~0.74為一般符合,0.01~0.39為缺乏符合 [3] 。
1.2.6 Cut-off值評(píng)價(jià)方法
為了評(píng)價(jià)兩種試劑盒截?cái)帱c(diǎn)或臨界值的合理性,將考核血清盤(pán)中18份陰性血清及隨機(jī)抽取的西安市無(wú)償獻(xiàn)血者梅毒抗體陰性血清100人份測(cè)量出的OD值編制頻數(shù)分布表,按篩檢試驗(yàn)正常值范圍確定方法 [4] ,分別用統(tǒng)計(jì)學(xué)界限的正態(tài)分布法及百分位數(shù)法計(jì)算出每種試劑盒的Cut-off值,并與按試劑盒說(shuō)明書(shū)規(guī)定計(jì)算出的Cut-off值比較,結(jié)合陰性、陽(yáng)性O(shè)D值頻數(shù)分布特點(diǎn),分析評(píng)價(jià)其合理性。
2 結(jié)果
2.1 對(duì)考核血清篩檢結(jié)果 在已知22份陽(yáng)性中,
ELISA試劑盒1篩檢出21份,ELISA2篩檢出22份,在已知18份陰性標(biāo)本中,ELISA1與ELISA2均檢出17份。
2.2 真實(shí)性評(píng)價(jià) 利用兩種試劑盒的篩檢結(jié)果,計(jì)算出評(píng)價(jià)真實(shí)性的8個(gè)指標(biāo)。

2.3 可靠性評(píng)價(jià) ELISA1與ELISA2兩次重復(fù)檢出的陽(yáng)性份數(shù)相同,重復(fù)試驗(yàn)的符合率均為100%,卡帕值均為1.00。
2.4 Cut-off值的評(píng)價(jià)
依據(jù)ELISA1與ELISA2試劑盒對(duì)考核血清盤(pán)18份陰性血清及100份西安市無(wú)償獻(xiàn)血者梅 毒抗體陰性血清測(cè)量的OD值,用統(tǒng)計(jì)學(xué)界限的正態(tài)分布法與百分位數(shù)法分別計(jì)算其Cut-off值,按兩種ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)規(guī)定方法分別計(jì)算出zui低Cut-off值,并將3種Cut-off值進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn),按規(guī)范的正態(tài)分布法與百分位數(shù)法計(jì)算出的Cut-off值均遠(yuǎn)低于試劑盒說(shuō)明書(shū)規(guī)定的Cut-offzui小值,但結(jié)合140份無(wú)償獻(xiàn)血者陽(yáng)性與陰性O(shè)D值實(shí)際頻率分布特點(diǎn)分析,試劑盒規(guī)定的截?cái)帱c(diǎn)是合理的,如果按統(tǒng)計(jì)界限計(jì)算的Cut-off值判讀,并不能提高試劑盒的靈敏度,反而會(huì)使假陽(yáng)性率升高。 
ELISA1及ELISA2的靈敏度分別為95.5%,100.0%,特異度分別為94.4%,94.4%,約登指數(shù)分別為0.90,0.94,兩種試劑的重復(fù)符合率均為100.0%,兩種試劑的Cut-off值是合理的。
3 討論
評(píng)價(jià)某項(xiàng)篩檢試驗(yàn)需要有一個(gè)*的客觀(guān)性強(qiáng)的金標(biāo)準(zhǔn),衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的梅毒抗體考核血清盤(pán)樣本來(lái)自獻(xiàn)血人群,陰、陽(yáng)性界限清楚,含有梅毒抗體多種效價(jià)的血清,客觀(guān)性強(qiáng),是*的金標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于篩檢試驗(yàn)的評(píng)價(jià)不僅要評(píng)價(jià)靈敏度、特異度,還需評(píng)價(jià)約登指數(shù)等多項(xiàng)綜合性指標(biāo)及可靠性指標(biāo),而且還需要對(duì)試劑盒陰性與陽(yáng)性的截?cái)帱c(diǎn)(Cut-off值)的合理性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
在既往文獻(xiàn)中僅有個(gè)別報(bào)道用多項(xiàng)評(píng)價(jià)真實(shí)性指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià) [5] 。本研究使用
ELISA試劑盒方法對(duì)梅毒抗體進(jìn)行篩檢,并對(duì)該試驗(yàn)的兩種ELISA試劑盒的多項(xiàng)真實(shí)性指標(biāo)進(jìn)行了客觀(guān)評(píng)價(jià),而且對(duì)可靠性指標(biāo)及Cut-off值的合理性進(jìn)行了分析、比較與評(píng)價(jià),結(jié)果發(fā)現(xiàn),ELISA2的靈敏度與應(yīng)用價(jià)值更大。根據(jù)考核血清盤(pán)中陰性血清及無(wú)償獻(xiàn)血者梅毒抗體陰性血清共118份篩檢結(jié)果的OD值,分別用正態(tài)分布法及百分位數(shù)法計(jì)算出Cut-off值,發(fā)現(xiàn)計(jì)算值遠(yuǎn)低于試劑盒規(guī)定的zui小Cut-off值,但結(jié)合118份陰性與22份陽(yáng)性標(biāo)本實(shí)際分布特點(diǎn)分析,試劑盒規(guī)定的Cut-off值是合理的,因?yàn)槿绻蠢碚撚?jì)算值作為截?cái)帱c(diǎn),會(huì)使篩檢試驗(yàn)的假陽(yáng)性率提高,造成血液資源浪費(fèi),從而降低其在獻(xiàn)血員篩檢中的應(yīng)用價(jià)值。兩種試劑聯(lián)合篩檢可保證輸血的安全性,如果能進(jìn)一步提高試劑的靈敏度與特異度,將會(huì)具有更大的臨床應(yīng)用價(jià)值。