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ELISA試劑盒競(jìng)爭(zhēng)抑制法操作問題

2014-01-25 [1809]

ELISA試劑盒方法做兩對(duì)半,其中HBsAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗原/抗體夾心法檢測(cè),而HBcAb、HBeAb使用競(jìng)爭(zhēng)抑制法檢測(cè)。而競(jìng)爭(zhēng)抑制法的原理:酶標(biāo)抗體與樣本抗體在同樣的體系中,與固相抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合是等比關(guān)系。理論上講,應(yīng)該先將樣本與酶標(biāo)抗體先行混勻,然后加入反應(yīng)也進(jìn)行。但實(shí)際工作中并非如此,都是分開加入反應(yīng)孔。這樣會(huì)造成先加入的先結(jié)合,與后加入者并不是公平的關(guān)系,因而也不符合等比原則。特別是在放置時(shí)間長(zhǎng),且溫度高的情況下,對(duì)結(jié)果有很大的影響。

第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院對(duì)此造成的影響進(jìn)行了研究。將94份陰性標(biāo)本用生理鹽水進(jìn)行1:30稀釋,在加入標(biāo)本后按下表時(shí)間放置后將陰性標(biāo)本94份并用生理鹽水進(jìn)行1:30稀釋,在加入標(biāo)本后按下表時(shí)間放置后再加入酶標(biāo)抗體,然后檢測(cè)結(jié)果如下: 

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    從上表可以看出,如果同時(shí)加入標(biāo)本與酶標(biāo)抗體,沒出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。2分鐘后再加入酶標(biāo)抗體,由于標(biāo)本比酶標(biāo)抗體先結(jié) 合了兩分鐘,因此出現(xiàn)了7.4%的假陽性。30分鐘后再加,假陽性高達(dá)57.4%。因此建議競(jìng)爭(zhēng)抑制法的項(xiàng)目,加十個(gè)樣本后立即加酶標(biāo)抗體,這樣對(duì)檢測(cè)結(jié)果沒有影響。