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影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法

2013-12-17 [842]

ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。 
操作步驟 
 選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。 
加   樣 
 1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣; 
 2.手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 
 3.加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。 
 1.標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
 2.加樣后及時放入孵箱。 
 3.加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 

4.如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 

5.標本較多時,請分批操作。 
  孵   育  
 1.孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*; 
 2.孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。 
 1.貼封片或加蓋; 
 2.按說明步驟嚴格控制操作時間。 
洗   板 
 1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 

2.采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。 

3.反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 
 1.保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 
 2.合理安排,或多用幾臺洗板機。 
  顯   色 
 1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑; 
 2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。 
 1. 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 
 2. 加樣時保持顯色劑不外流; 
 3.A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。 
  終   止 
 加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。 
 加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。 
 讀   板 
 讀板時板底不清潔。 
 應(yīng)保證酶標板清潔。 
 全過程 
 1.整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 
 2.實現(xiàn)ELISA試劑盒檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。 
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。