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豬高鐵血紅蛋白ELISA試劑盒說明書

2013-12-09 [788]

豬高鐵血紅蛋白ELISA試劑盒說明書  
  用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。
  
  保存:2-8℃
  
  主要用途:科研檢測ELISA試劑盒
  
  凡在本司購買試劑盒客戶,我司提供免費代測服務,一周內出結果,保證質量。
  
  1、避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
  
  2、實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
  
  3、不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
  
  樣本要求
  
  1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
  
  2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
  
  3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。
  
  豬高鐵血紅蛋白ELISA試劑盒說明書試驗時,注意事項如下:
  
  1.正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
  
  2.在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
  
  (1)固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
  
  (2)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
  
 ?。?)酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
  
  (4)酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入
  
  豬高鐵血紅蛋白ELISA試劑盒說明書性能
  
  1.靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
  
  2.特異性:不與其它細胞因子反應。
  
  3.重復性:板內、板間變異系數(shù)均小于10%。
  
  結果判斷與分析
  
  1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
  
  2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的IL-1標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的IL-1含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
  
  3、檢測值范圍:0-800pg/ml
  
  4、敏感度:1.0pg/ml