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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中血清標(biāo)本的采集、保存及注意事項(xiàng)

2013-09-24 [970]

1.標(biāo)本貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 標(biāo)本在2~8~C下保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng),IgG可聚合成多聚體,在間接法ELISA試劑盒測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、甚至造成假陽(yáng)性。血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離,則可以在2~8~C下保存1周,如為有菌操作,則建議冷凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)在一70~C以下。
2.標(biāo)本溶血 要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA 測(cè)定中,如血清 標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
3.ELISA試劑盒冷凍保存標(biāo)本避免反復(fù)凍融 冷凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。此外,標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的渾濁或絮狀物時(shí),應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。
4.標(biāo)本凝固不全 血液采集后,如收集管中無(wú)促凝劑和抗凝劑,則血液通常在半小時(shí)后開(kāi)始凝固,18~24h*凝固。日常檢驗(yàn)中,常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即離心分離血清,此時(shí)因血液沒(méi)有*凝固,離出的“血清”并非為*的血清,其中仍殘留部分纖維蛋白原,如將其加入微孔中,在ELISA測(cè)定過(guò)程中仍可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊,易造成假陽(yáng)性結(jié)果。因此,血液標(biāo)本采集后,應(yīng)使其充分凝固后再分離血清,或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?br />5.標(biāo)本被細(xì)菌污染 樣本的采集及血清 分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長(zhǎng),其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體 等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的p—半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的ELISA試劑盒測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。