胎牛血清白蛋白如何提取
胎牛血清白蛋白(BSA),又稱第五組分,是牛血清中的一種白蛋白,包含583個(gè)氨基酸殘基,分子量為66.430 kDa,等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,例如在western blot中作為Blocking agent;在酶切反應(yīng)緩沖液中加入BSA,通過(guò)提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度,對(duì)酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附,能減輕有些酶的變性,能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱,表面張力及化學(xué)因素引起的變性。是胎牛血清中的一種球蛋白,一般獲取胎牛血清白蛋白,常常運(yùn)用的方法是加熱法。
下面一起和上海研域生物來(lái)看看是怎樣獲取胎牛血清白蛋白的!
一、所需材料
胎牛血清取近郊屠宰場(chǎng),以檸檬酸三鈉為抗凝劑,血液搜集后隨即分別出血漿備用。需要的試劑有血清白蛋白;溴jia酚氯;醋酸纖維素薄膜,別的試劑均為分析純。獲取胎牛血清白蛋白需要準(zhǔn)備 LG-6型大容量冷凍離心機(jī),DF-C型電泳儀,UV-754型紫外可見分光光度計(jì),PHS-2型酸度計(jì)。
二、具體方法
白蛋白含量測(cè)定 選用溴jia酚氯法,以胎牛血清白蛋白為規(guī)范. 白蛋白純度的測(cè)定 選用醋酸纖維素薄膜電泳法。吸光度值的測(cè)定 用分光光度計(jì)直接測(cè)定蛋白質(zhì)溶液在波長(zhǎng)為403 nm處的光吸收值,然后折算成濃度為10 g/L時(shí)牛血清白蛋白的光吸收值,用A403表明。
胎牛血清白蛋白的生產(chǎn)工藝 新鮮抗凝牛血用LC-6型大容量離心機(jī)(3 000 r/min×30 min)離心分別出血漿,加一定量的蒸餾水稀釋,再參與恰當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑和蛋白沉淀劑,然后按下述方法進(jìn)行試驗(yàn)處理:
1.不一樣pH值溶液對(duì)白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在其它條件固定的情況下,試驗(yàn)不一樣pH值對(duì)白蛋白的收率、純度及A403值的影響。
2.不一樣加熱保溫時(shí)間對(duì)白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在選定的pH值和其它條件固定的情況下,試驗(yàn)不一樣加熱保溫時(shí)間對(duì)白蛋白的收率、純度及A403值的影響。
3.不一樣稀釋倍數(shù)對(duì)白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在選定的pH值和保溫時(shí)間及其它條件固定的情況下,試驗(yàn)不一樣稀釋倍數(shù)對(duì)白蛋白的收率、純度及A403值的影響。
4.不一樣加熱溫度對(duì)白蛋白的收率和質(zhì)量的影響 在其它條件選定的情況下,試驗(yàn)不一樣加熱溫度對(duì)白蛋白的收率、純度及A403值的影響。