如何生成更可靠的免疫ELISA表型數(shù)據(jù)
ELISA數(shù)據(jù)中雖然 表面 CD分子仍是用于免疫表型的常用的標(biāo)記 ,但常規(guī)平行檢測(cè) 的CD分子卻有所增加。研究者把其它細(xì)胞表面 的蛋白和細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記 物加入到免疫表型分析 中,已經(jīng)成為標(biāo)準(zhǔn)做法 。因?yàn)檫@些進(jìn)展不可避免地使得 研究設(shè)計(jì)更加具有挑戰(zhàn)性,我們咨詢了一組專家來(lái)幫助您生成更可靠的免疫表型數(shù)據(jù) 。
研究免疫表型 時(shí),其復(fù)雜性是不同 的。
從基礎(chǔ)研究到臨床監(jiān)測(cè) ,研究者 對(duì)這些 細(xì)胞 進(jìn)行 免疫 表型 分析 ,有很多原因 。 Sartorius細(xì)胞 分析測(cè)試 開(kāi)發(fā) 經(jīng)理 MarkCarter指出 ,免疫表型研究的范圍 從識(shí)別單一表型到復(fù)雜的多參數(shù)應(yīng)用 ,比如 識(shí)別 從HIV 患者的血液樣本中提取 CD4+T細(xì)胞 。 他說(shuō) :“在試劑 、儀器 和軟件 方面 的進(jìn)步 使得 免疫 表型 研究 更為 復(fù)雜 。" 例如 ,現(xiàn)在可以對(duì)分化 細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)量控制 ;描述 癌癥 及其 治療 反應(yīng) ;研究 疾病 對(duì)病人 免疫系統(tǒng) 的影響 ;或者 為器官捐贈(zèng)的捐獻(xiàn)者 和接受者進(jìn)行 免疫 配對(duì) 。
用到 的標(biāo)記 的數(shù)量和類型決定了免疫 表型 的目的 。 CellSignalingTechnology高級(jí) 開(kāi)發(fā) 科學(xué)家 SarahKlein博士指出 :“流式細(xì)胞術(shù)免疫 表型分析的閱讀次數(shù)少為兩次 ,因?yàn)槟?總是 想將細(xì)胞 活性 的標(biāo)記 與你選擇 的標(biāo)記結(jié)合起來(lái) .“有些 實(shí)驗(yàn)室在有特殊問(wèn)題 要問(wèn)時(shí)會(huì) 做3-5個(gè)標(biāo)記 免疫表型分析 ,而另一些 實(shí)驗(yàn)室 通常 在多個(gè) 平臺(tái) 上使用 10 -15 個(gè)標(biāo)簽組合 。 大數(shù)量的標(biāo)記只是生物信息學(xué) 平臺(tái) 的局限性 ,包括檢測(cè)技術(shù) 、可獲得 的抗體 和分析 大型 面板 提供 的大量數(shù)據(jù) 。
Bio -Rad流式細(xì)胞 學(xué)現(xiàn)場(chǎng) 營(yíng)銷專家 MikeBlundell對(duì)此 表示 贊同 ,并指出 ,盡管可以單獨(dú)使用一種標(biāo)記 來(lái)識(shí)別特定類型 的細(xì)胞 (如T細(xì)胞 CD3或B細(xì)胞 CD19),但是 確定 血液 中的一個(gè)普通譜系可能需要四個(gè)標(biāo)記 ,并確定特定的譜系組合 ,就可以把這一 數(shù)字 增加 到八個(gè) 。 他說(shuō):“監(jiān)控 激活狀態(tài) 、記憶 狀態(tài) 和多個(gè) 子集 的譜系 通常 需要 超過(guò)20個(gè)標(biāo)記 。 比如,即使 只看T細(xì)胞亞群,你通常也想要確定樣品中其他類型的細(xì)胞 ,以確保他們不會(huì)受到影響 ,或者從你的分析中去除這些細(xì)胞 。
在面板中可以包含的標(biāo)簽 越多,需要用到的樣本 就越少 ,"MichelleM.Poulin博士解釋道。Fluidigm質(zhì)譜流式細(xì)胞術(shù)領(lǐng)域應(yīng)用的高級(jí)經(jīng)理。研究者們用質(zhì)譜流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)來(lái)進(jìn)行免疫表型分析,通常會(huì)將超過(guò)30到40個(gè)標(biāo)記結(jié)合在一起 。