細(xì)胞五分類技能及其運(yùn)用發(fā)展
細(xì)胞分析儀是醫(yī)院臨床查驗(yàn)運(yùn)用十分廣泛的儀器之一,是指對(duì)必定體積內(nèi)血細(xì)胞數(shù)量及異質(zhì)性進(jìn)行分析的儀器。20世紀(jì)9o年代以來(lái),跟著電子技能、流式細(xì)胞技能、激光技能、電子計(jì)算機(jī)技能和新熒光化學(xué)物質(zhì)等各種高新技能在血細(xì)胞分析儀中的運(yùn)用.使血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)原理不斷完善、測(cè)量參數(shù)不斷增加、檢測(cè)水平不斷提高.尤其在白細(xì)胞五分類技能方面,已發(fā)展到使用多項(xiàng)技能(如射頻、細(xì)胞化學(xué)染色、流式細(xì)胞術(shù)和熒光染色技能等)聯(lián)合一起檢測(cè)一個(gè)白細(xì)胞.再用先進(jìn)的計(jì)算機(jī)技能區(qū)別、辨別經(jīng)上述辦法處理后的各自細(xì)胞間的細(xì)胞不同.綜合分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),得出較為精確的白細(xì)胞分類成果。為臨床疾病的診斷、治療供給了重要的實(shí)驗(yàn)室根據(jù)。近年來(lái)。能夠?qū)Π准?xì)胞進(jìn)行五分類計(jì)數(shù)的血細(xì)胞分析儀現(xiàn)已普遍運(yùn)用。本文就現(xiàn)在血細(xì)胞五分類測(cè)定中常用技能及其運(yùn)用發(fā)展作一綜述。
1 細(xì)胞五分類技能的原理
1. 流式細(xì)胞術(shù)
流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,F(xiàn)CM)是一種綜合運(yùn)用光學(xué)、機(jī)械學(xué)、流體力學(xué)、電子計(jì)算機(jī)、細(xì)胞生物學(xué)、分子免疫學(xué)等學(xué)科技能,使被測(cè)溶液流經(jīng)測(cè)量區(qū)域,并逐個(gè)檢測(cè)其間每一個(gè)細(xì)胞的物理和化學(xué)特性,從而對(duì)高速活動(dòng)的細(xì)胞或亞細(xì)胞進(jìn)行快速定量測(cè)定和分析的辦法。
首先,待測(cè)細(xì)胞經(jīng)處理或染色后被壓人活動(dòng)室,與此一起,不含細(xì)胞的緩沖液在高壓下從鞘液管噴出,鞘液管人口方向與待測(cè)樣品流成必定視點(diǎn),這樣鞘液就能被包繞著樣品高速活動(dòng),組成一個(gè)圓形的流束,待測(cè)細(xì)胞在包繞下單行擺放,順次經(jīng)過檢測(cè)區(qū)域.在激光束的照射下發(fā)生散射光和激起熒光。這兩個(gè)光源信號(hào)分別反映了細(xì)胞體積的巨細(xì)和內(nèi)部的信息.經(jīng)光電倍增管接納后可轉(zhuǎn)換為電信號(hào),再經(jīng)過模,數(shù)轉(zhuǎn)換器.將接連的電信號(hào)轉(zhuǎn)換為可被計(jì)算機(jī)識(shí)別的數(shù)字信號(hào),經(jīng)計(jì)算機(jī)處理,可將分析成果顯示在屏幕上。
為了確保細(xì)胞單個(gè)擺放地逐個(gè)經(jīng)過檢測(cè)區(qū)域,鞘流技能在流式細(xì)胞術(shù)中被廣泛運(yùn)用。根據(jù)層流理論,因?yàn)閮煞N液體的流速和壓力不同。在必定條件下樣品溶液與包裹它的鞘液在活動(dòng)中能夠保持彼此分離并且同軸。一起鞘液流能夠加快樣品溶液中顆粒的活動(dòng)并迫使他們的活動(dòng)軌道保持在液流的中軸線上,使細(xì)胞單擺放地逐個(gè)經(jīng)過檢測(cè)區(qū)域,這便是所謂的液流聚集原理
2.阻抗法
根據(jù)庫(kù)爾特原理,將不良導(dǎo)體血液按必定份額稀釋于等滲的電解液中,在小孔電極的兩側(cè)加一恒流源.在負(fù)壓效果下,使稀釋的血細(xì)胞經(jīng)過小孔。當(dāng)細(xì)胞經(jīng)過截面時(shí)會(huì)因?yàn)殡娮柙龃蟀l(fā)生相應(yīng)的脈沖,其脈沖的幅度與細(xì)胞的體積成正比,脈沖的頻度與細(xì)胞的數(shù)量成正比。這便是的庫(kù)爾特原理或稱變阻脈沖原理。使用庫(kù)爾特原理能夠有效地區(qū)別淋巴及單核細(xì)胞。
3. 激光散射法/多視點(diǎn)偏振光散射技能
根據(jù)光散射理論,當(dāng)激光照射到活動(dòng)室內(nèi)流過的每一個(gè)細(xì)胞時(shí),因?yàn)榧?xì)胞的物理特性,部分光線從細(xì)胞上經(jīng)不同的視點(diǎn)散射。其間,前向小視點(diǎn)散射光的光強(qiáng)能夠反響細(xì)胞體積;大視點(diǎn)散射光的光強(qiáng)能夠反響細(xì)胞核,漿復(fù)雜度和細(xì)胞顆粒的信息;而側(cè)向散射光的光強(qiáng)能夠反響細(xì)胞膜、核膜、細(xì)胞質(zhì)的變化。因而,能夠根據(jù)細(xì)胞表明光散射的特色對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類。用激光光源發(fā)生的單色光束直接進(jìn)入計(jì)數(shù)池的敏感區(qū),在不同視點(diǎn)(10度~7O度)對(duì)每個(gè)細(xì)胞進(jìn)行掃描分析,測(cè)定其散射光強(qiáng)度,從而供給細(xì)胞結(jié)構(gòu)、形態(tài)的光散射信息。因?yàn)榇诸w粒細(xì)胞的散射強(qiáng)度比細(xì)顆粒細(xì)胞更強(qiáng),故光散射對(duì)細(xì)胞顆粒的構(gòu)型和顆粒質(zhì)量具有很好的區(qū)別能力。
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