一般ELISA試劑盒中有幾次加樣步聚
ELISA檢測試劑盒中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留意不行濺起,不行產(chǎn)生氣泡。
在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反響的完結(jié)需要有一定的溫度和時(shí)刻,這一保溫進(jìn)程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當(dāng)。
加標(biāo)本一般用微量加樣器,按規(guī)則的量參加板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,避免發(fā)作交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液,ELISA試劑盒再在其間參加血清標(biāo)本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保 證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器,使加液進(jìn)程迅速完結(jié)。
ELISA屬固相,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。
以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標(biāo)本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī),只要貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個(gè)逐步平衡的進(jìn)程,因而需經(jīng)分散才能達(dá)到反響的結(jié)尾。在其后參加的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這便是為什么ELISA反響總是需要一定時(shí)刻的溫育。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA試劑盒辦法作反響動(dòng)力學(xué)研究時(shí),實(shí)驗(yàn)標(biāo)明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí),ELISA檢測試劑盒產(chǎn)物的生成可達(dá)。為加速反響,可提高反響的溫度,有些實(shí)驗(yàn)在43℃進(jìn)行,但不宜選用更高的溫度??乖贵w反響4℃更為*,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中,以構(gòu)成多的沉淀。但因所需時(shí)刻太長,在ELISA中一般不予選用。