今日揭秘ELISA技巧重點(diǎn)檢測(cè)有哪些
又是新的一天,11月過(guò)的可真快,仿佛剛剛開始,又到了一半了。實(shí)驗(yàn)不光要注意一些事項(xiàng)還要學(xué)會(huì)掌握技巧,而實(shí)驗(yàn)是要靠不斷的實(shí)行來(lái)積累經(jīng)驗(yàn)的,ELISA試劑盒操作次數(shù)多了自然也就熟練了,而對(duì)于ELISA新手來(lái)說(shuō),在實(shí)驗(yàn)之前掌握技巧可有事半功倍效果。下面就來(lái)看看研域(上海)生物今天為您推薦的文章內(nèi)容:新日揭秘ELISA檢測(cè)技巧有哪些。
如何防止常見ELISA試劑盒樣品蒸發(fā)?
試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo) 板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
研域(上海)化學(xué)技術(shù)部人員是這樣配制試劑的:
Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請(qǐng)配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,ELISA試劑盒盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí),一次不要小于10μl),以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差;請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
加樣步驟的經(jīng)驗(yàn)總結(jié):
加樣或加試劑時(shí),請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本/標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時(shí),*個(gè)孔與zui后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大,將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育”時(shí)間,從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制 在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。
在ELISA檢測(cè)技巧中,研域(上海)生物建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)。
在ELISA測(cè)定中試劑的準(zhǔn)備zui為關(guān)鍵的是,ELISA試劑盒在實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20min以上后,再進(jìn)行測(cè)定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所要求的高度,以滿足測(cè)定要求。
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