介紹ELISA試劑盒組份和操作過程
ELISA中有三個(gè)必要的試劑:免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:
1.已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)
2.酶符號(hào)的抗原或抗體(結(jié)合物);
3.酶的底物;
4.陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中),參考規(guī)范品和操控血清(定量測(cè)定中);
5.結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;
6.洗刷液
7.酶反響停止液。
ELISA試劑盒操作步驟:
1. 加規(guī)范品:在酶標(biāo)包被板上設(shè)規(guī)范品孔,順次參加不同濃度的規(guī)范品50ul(建議每個(gè)濃度做2個(gè)平行孔)
2. 加樣:別離設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品40μl,然后再加樣品親和素10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄悄晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗刷:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:除空白孔外每孔參加酶標(biāo)試劑50μl。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗刷:操作同5。
9. 顯色:每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震動(dòng)混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 停止:ELISA試劑盒每孔加停止液50μl,停止反響(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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