實驗ELISA試劑盒注意事項有哪些
一年有四個時節(jié),每個時節(jié)都有不同的景色,而我喜歡秋季起時的壯麗景色。秋季,人們好象來到了一個幽雅安靜的jing界,來到了一個晶亮透剔的童話般的。松的那清香,白雪的那冰香,給人一種涼瑩瑩的勸慰。一切都在過濾,一切都在進步,連我的心靈也在凈化,變得純潔而又夸姣。
在ELISA試驗前的注意事項
1、仔細閱讀說明書
2、確認試劑盒在有效期內
3、按說明書確認一切試劑*(數(shù)量、體積)
4、標本制備要標準,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(儲存),盡量分裝做備份。短期內無法試驗者,注意低溫保存
5、準備好一切試驗額定所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等
6、依據(jù)檢測標本數(shù)量確認所需試劑的量
7、按說明書將所用試劑平衡至室溫,制造所需試劑
ELISA試驗時,注意事項如下:
1.正式試驗時,應別離以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證試驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反響,可采用羊血清、兔血清或BSA等關閉。
2.在ELISA中,進行各項試驗條件的挑選是很重要的,其間包含:
(1)固相載體的挑選:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等?,F(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體,在運用前均可進行挑選:用等量抗原包被,在同一試驗條件下進行反響,查詢其顯色反響是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否出色。
(2)包被抗體(或抗原)的挑選:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有必定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相一同,查詢陽性標本的OD值。挑選OD值大而蛋白量少的濃度。關于大都蛋白質來說一般為1~10μg/ml。