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在ELISA實(shí)驗(yàn)前的留意事項(xiàng)

2019-07-12 [1450]

ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí),留意事項(xiàng)如下:
正式實(shí)驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制實(shí)驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,闡明有非特異性反響,可選用羊血清、兔血清或BSA等關(guān)閉。
在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的挑選是很重要的
實(shí)驗(yàn)其中包括:
1)固相載體的挑選:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行挑選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反響,調(diào)查其顯色反響是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
2)包被抗體(或抗原)的挑選:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多選用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它實(shí)驗(yàn)條件相同時(shí),調(diào)查陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。挑選OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。關(guān)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。
仔細(xì)閱讀闡明書
1.確認(rèn)試劑盒在有效期內(nèi)
2.按闡明書確認(rèn)一切試劑*(數(shù)量、體積)
3.標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者,留意低溫保存
4.準(zhǔn)備好一切實(shí)驗(yàn)額定所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等
5.依據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確認(rèn)所需試劑的量
6.按闡明書將所用試劑平衡至室溫,制造所需試劑
公司首要署理多種品牌進(jìn)口原裝、ELISA試劑盒,細(xì)胞等到等。本公司作為酶聯(lián)免疫供貨商,憑仗的技能,的售前,售中,售后免費(fèi)代測(cè)服務(wù),共同鑄就高品質(zhì)的產(chǎn)品。多年專業(yè)酶免服務(wù),質(zhì)量確保,可免費(fèi)提供代測(cè)服務(wù),一周內(nèi)出結(jié)果。咨詢訂購(gòu)。