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面臨操作ELISA試劑盒實驗影響

2019-05-08 [1353]

ELISA試劑盒在科研領(lǐng)域運用尤為廣泛,它以其特異性強和靈敏度高的特征被我們所親睞,今天與我們說說ELISA試劑盒測定的進程。
ELISA試劑盒測定進程:
固相包被→加待測樣品→溫育→洗刷+加酶標物→溫育→洗刷→加底物→溫育一加接連液→比色→判定作用。


ELISA試劑盒操作較冗繁,在操作中應(yīng)留神以下4個方面:
1.在成批手工檢測中,還應(yīng)留神操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異,使抗原抗體反響和酶促反響時間不一致,對競爭法及定量檢測影響很大,不留神可能會導(dǎo)致過錯作用或定量不準。
2.洗刷是ELISA試劑盒操作進程中抉擇實驗勝敗的一個要害進程。意圖是除去未結(jié)合的免疫反響物,接連抗原抗體反響,除去標本中與反響無關(guān)的成分、游離的酶標物以及反響進程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。可用洗板機洗板或手工洗板,前者洗刷質(zhì)量較好,各反響孔洗刷作用均一,批內(nèi)、批間差異小,手工洗板應(yīng)留神操控各孔洗刷作用,差異不宜太大。
3.跟著病情的展開或由其他要素影響,某些抗體在機體內(nèi)的含量發(fā)作大幅不堅定,因此有必要對標本進行預(yù)處理。直接法測定中,標本恰當稀釋還可下降非特異性反響。
4.加樣一般運用加液器,在ELISA試劑盒中一般有4次加樣:加標本、加酶結(jié)合物、加底物和加接連液。加標本時有必要每份標本運用一支移液器吸嘴,防止交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和接連液時則不需更換吸嘴。
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