ELISA實驗吸光值衰減是什么原因?
高教師向吳司理詳細(xì)的說明晰試驗中呈現(xiàn)的狀況,于是來電向研域(上海)生物銷售人員吳司理咨詢:加完顯色液(購買)顯色必定時刻后,再加停止液(2M H2SO4,自己制造)后,當(dāng)即測驗其吸光度值,等過幾分鐘再測驗吸光度值,發(fā)現(xiàn)兩次測得的吸光度值發(fā)作衰減。第2次均小于次。
吳司理對試驗的問題有了必定的了解,隨后組織技術(shù)人員為高教師去,為其解決這一問題,高教師恍悟道:本來ELISA吸光度值衰減這樣處理就可以啦。
其實詳細(xì)的原因也很簡單,有可能是顯色液的質(zhì)量不夠好。一般狀況下,停止反應(yīng)后OD值的下降前期不是很明顯。停止后,吸光度值是會隨著時刻衰減,所以一般是加完停止液后當(dāng)即測,這樣比較準(zhǔn)。西北大學(xué)的高教師在操作ELISA試劑盒試驗的時分發(fā)現(xiàn)了一個問題,
并且,加停止液時,從*條加到第12條后,測驗發(fā)現(xiàn),吸光度值從1-12條逐級衰減。條件是這12條酶標(biāo)板都是同一種產(chǎn)品,并且包被相同蛋白。
再次剖析12條顯現(xiàn)逐級遞減的原因看看是否是:
① 顯色時刻調(diào)整,如果您現(xiàn)在的顯色時刻是10MIN,那調(diào)整到30MIN,再加停止液,調(diào)查上述現(xiàn)象是否呈現(xiàn)。
② 停止液中參加少數(shù)甘油看下怎么樣。
ELISA試劑盒顯色時刻是30分鐘,停止后要求在30分鐘內(nèi)檢測,參加停止液后,在參加停止液后2到3分終內(nèi)檢測,這是OD值相對比較高。擬合值能到達(dá)四個9。
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