ELISA試劑盒時(shí)許多重要的環(huán)節(jié)都會(huì)影響到ELISA試劑盒檢測(cè)的質(zhì)量。
下面與我們共享幾種辦法：
一、辦法學(xué)的影響
ELISA測(cè)定形式包含以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競賽抑制法，其間競賽抑制法因受操作時(shí)差所引起的不公平競賽等要素的影響，成果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難操控。
二、試劑要素
（1）試劑的挑選
免疫檢測(cè)的原理均根據(jù)抗原抗體反響。因?yàn)樵摲错戇M(jìn)程受多種要素的影響，如普遍存在基質(zhì)效應(yīng)、交叉反響等，因而檢測(cè)成果難以溯源，不同辦法、不同試劑之間乃至同一試劑不同批號(hào)間成果均缺少可比性。試劑質(zhì)量在很大程度上決議了檢測(cè)的水平，因而在引進(jìn)新項(xiàng)目之前有必要對(duì)試劑進(jìn)行嚴(yán)格的點(diǎn)評(píng)。試劑的點(diǎn)評(píng)有以下幾個(gè)進(jìn)程：⑴確定展開該項(xiàng)意圖必要性；⑵了解該項(xiàng)目現(xiàn)有的檢測(cè)辦法和原理；⑶在了解試劑的組成基礎(chǔ)上挑選多家試劑盒進(jìn)行比較，判別規(guī)范參閱辦法或參閱物質(zhì)，其次為臨床的滿意度及機(jī)構(gòu)的陳述如各級(jí)室間質(zhì)量點(diǎn)評(píng)、CDC陳述等；⑷定時(shí)對(duì)檢測(cè)成果進(jìn)行追尋反響直至終究認(rèn)可該試劑。
（2）試劑的預(yù)備
不同批次的ELISA試劑在制造進(jìn)程中很難確保質(zhì)量*一致，即使是經(jīng)過批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)成果也存在差異，因而有必要挑選和訂購長批號(hào)的試劑，并確保保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一規(guī)范能夠防止因試劑批號(hào)改動(dòng)而從頭建立質(zhì)控系統(tǒng)及從頭點(diǎn)評(píng)試劑的雜亂進(jìn)程，并且能夠確保成果的穩(wěn)定性；關(guān)于效期短、運(yùn)用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次運(yùn)用則取分裝部分即可，防止重復(fù)凍融形成試劑的失效。
試劑運(yùn)用前有必要平衡至室溫，否則會(huì)影響檢測(cè)下限。未用完的室內(nèi)質(zhì)控品及本次不需運(yùn)用的試劑應(yīng)密封并及時(shí)放回冰箱保存。
三、樣本要素
標(biāo)本攪擾要素包含內(nèi)源性攪擾要素和外源性攪擾要素，前者包含類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、本身抗體、溶菌酶等，后者包含標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本儲(chǔ)存時(shí)刻過長、標(biāo)本凝結(jié)不全、冷凍標(biāo)本的重復(fù)凍融等。其間外源性攪擾要素是咱們?cè)跈z測(cè)進(jìn)程中能夠防止也是有必要防止的要素，而防止內(nèi)源性要素的攪擾則首要經(jīng)過挑選適宜的試劑盒。在臨床中遇到少見的疑難病例時(shí)應(yīng)當(dāng)考慮到內(nèi)源性攪擾要素的存在。以下對(duì)外源性攪擾要素進(jìn)行扼要闡明：
（1）標(biāo)本溶血 要注意防止呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其具有類過氧化物的活性，因而，在以辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）為符號(hào)酶的ELISA測(cè)定中，如果血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡單在溫育進(jìn)程中吸附于固相，然后與后面參加的底物反響顯色。
（2）標(biāo)本被細(xì)菌污染 標(biāo)本的收集及血清別離要注意盡量防止細(xì)菌污染。細(xì)菌菌體中除可能含有內(nèi)源酶對(duì)測(cè)定發(fā)生非特異性攪擾外，還可能對(duì)抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果。別的標(biāo)本在保存中呈現(xiàn)渾濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉積后取上清檢測(cè)。
（3）冷凍保存標(biāo)本防止重復(fù)凍融 標(biāo)本的重復(fù)凍融會(huì)因其所發(fā)生的機(jī)械剪切力對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生破壞效果，使抗體效價(jià)下跌然后引起假陰性成果，ELISA試劑盒所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作屢次檢測(cè)，宜少數(shù)分裝凍存。此外，標(biāo)本在凍存時(shí)會(huì)因蛋白質(zhì)部分濃縮，散布不均，因而從頭融解的標(biāo)本有必要混勻，但不要進(jìn)行劇烈振蕩，重復(fù)顛倒即可。
（4）標(biāo)本儲(chǔ)存時(shí)刻過長 標(biāo)本在低溫下保存時(shí)刻過長，IgG可聚組成多聚體，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底加深、乃至呈現(xiàn)假陽性成果。通常情況下血清標(biāo)本可在2～8℃下保存l周，冷凍保存時(shí)刻會(huì)更長，但關(guān)于抗體或抗原含量低的標(biāo)本而言，則可能會(huì)因抗體掉價(jià)、抗原分化而呈現(xiàn)假陰性成果。
（5）ELISA試劑盒標(biāo)本凝結(jié)不全 血液通常在收集后半小時(shí)后開端凝結(jié)，18～24h*凝結(jié)。如果在血液未凝結(jié)時(shí)即離心別離血清，則可因纖維蛋白原非特異吸附于微孔而形成假陽性成果。為了縮短標(biāo)本處理時(shí)刻，能夠在離心前將血液標(biāo)本置于溫箱中溫育或許選用帶別離膠的采血管或于采血管中參加恰當(dāng)?shù)拇倌齽┮约涌煅宓膭e離。