ELISA試驗(yàn)與完好大鼠ELISA試劑盒的聯(lián)系
ELISA試劑盒包括以下各組分:已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);酶符號(hào)的抗原或抗體(物);酶的底物;陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中),大鼠ELISA試劑盒參閱標(biāo)準(zhǔn)品和操控血清(定量測(cè)定中);酶聯(lián)物(物)及標(biāo)本的稀釋液;洗刷液;酶反響停止液。ELISA中有三個(gè)必要的試劑:免疫吸附劑、物和酶的底物等。
疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下通??杀4?個(gè)月以上??勺鱁LISA中載體的資料良多,zui常用的是聚苯乙烯。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體,反響后用磁鐵的招引進(jìn)行別離,洗刷利便,大鼠ELISA試劑盒通常均配以特殊儀器。為對(duì)比不一樣固相在某一ELISA測(cè)定中的好壞,可應(yīng)用如下的實(shí)驗(yàn):用別的免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和陰性標(biāo)本,將它們進(jìn)行一系列稀釋后,在不一樣的固相載體上按預(yù)訂的ELISA操作過(guò)程進(jìn)行測(cè)定,然后對(duì)比成果。小試管還能夠當(dāng)作比色杯,zui終直接放入分光光度計(jì)中比色。直接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大前進(jìn),因而含雜質(zhì)較多的抗原也可選用捕捉包被法,實(shí)驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改進(jìn),重復(fù)性亦佳。
大鼠ELISA試劑盒聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的機(jī)能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍留存原來(lái)的免疫學(xué)活性,加之它的價(jià)格低廉,所以被遍及選用。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過(guò)物理吸附的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體外表的疏水基團(tuán)間的作用力。操控反響條件,使各孔讀數(shù)在吸光度0.8擺布。一切單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,應(yīng)小于10%。例如,在檢查抗DNA抗體時(shí),需用DNA作為包被抗原,而遍及的固相載體通常不能直接與核酸。ELISA板的特點(diǎn)是能夠同時(shí)進(jìn)行很多標(biāo)本的檢查,并可在特制的比色計(jì)上靈敏讀出成果。換言之,包被等于抗原或抗體到固相載體外表的過(guò)程。在哪一種載體上陽(yáng)性成果與陰性成果不同zui大,這種載體即是這一ELISA測(cè)定項(xiàng)目的zui合適的固相載體。
ELISA載體的外形主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。良好的ELISA板應(yīng)該是吸附機(jī)能好,空缺值低,孔底透明度高,各板之間、統(tǒng)一板各孔之間、統(tǒng)一板各孔之間機(jī)能附近。再者,球型小珠的外表弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體位點(diǎn)的露出面處于*反響狀況,大鼠ELISA試劑盒因而珠式ELISA的反響通常更為靈敏。IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力,其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上,抗體點(diǎn)露出于外,因而抗體的包被通常均選用直接吸附法。